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杆状病毒-昆虫细胞表达与纯化服务

杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)属于真核表达系统的一种,该表达系统具有较高的安全性,并且基因组比较大,可以插入较大的外源基因,在大分子量的蛋白表达方面具有很大优势。并且具有完备的翻译后加工修饰和高效表达外源基因的能力。该系统由转移载体、杆状病毒载体和宿主细胞组成。该系统采用一个或多个杆状病毒的超强启动子,将外源目的基因插入到启动子后,获得重组病毒,这种重组病毒在昆虫细胞复制的同时,使外源基因得到高效表达。BEVS被广泛应用于病毒疫苗开发(如流感病毒和HPV疫苗开发)、信号蛋白制备、细胞因子制备、激酶开发等方面。

系统优势

  • 基因容量大,可携带较大的基因片段,表达大分子量蛋白有优势;
  • 安全性高,杆状病毒具有严格的种属特异性;
  • 表达效率高,在被感染的晚期细胞中,蛋白可进行高效地表达;
  • 表达产物的翻译后修饰,尤其糖基化修饰与哺乳动物细胞类似,表达产物具有生物活性的可能性较高;
  • 杆状病毒较易扩增,可以大规模生产重组蛋白。

服务优势

  • 华美生物独有的表达体系,可实现bacmid低成本、大体积悬浮转染,且滴度高,可用于感染放大制备蛋白,较经典流程周期可缩短1-2周;
  • 高性价比,价格低至6500元起;
  • 货期短:最短35工作日即可交付;
  • 产量高,最高可达100mg/L。

我们承诺

无风险定制,不成功不收费

注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。

服务内容

步骤 服务项目 服务说明 华美生物特色 周期
1 质粒构建
密码子优化全基因合成 多载体优化
为了提高表达成功率以及获得更高表达量,进行多信号肽优化,在确保纯度的同时更大程度保证了蛋白的活性。
5-10工作日
PCR扩增产物通过酶切连接到pFastbac1等载体上
转化TOP10宿主
获得测序正确的重组质粒
2 重组Bacmid及高滴度病毒制备
转化DH10Bac构建重组Bacmid,PCR鉴定,提取Bacmid。 悬浮转染
悬浮转染方式大大提高了蛋白表达量,有效缩短实验周期
12-15工作日
重组Bacmid转染昆虫细胞,得到P0代病毒,电泳检测表达量,如有需要再将P0代病毒感染细胞得到P1-P2代病毒
3 扩大表达与纯化
P1或p2代病毒感染昆虫细胞 优化表达
经过优化后,通过一步转染培养最快5天内即可得到大量的目的蛋白,低代数的病毒毒液感染细胞即可得到大量目的蛋白
5-10工作日
通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白
4 其他(可选)服务
收费 酶切去除标签服务 灵活的附加服务
提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择
3个工作日
免费 可提供无菌操作、内毒素去除和冻干等服务(备注:冻干与无菌操作不可同时满足) 2个工作日
5 质控
进行纯度、浓度等检查,并提供QC报告 报告详细
为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告
3-5工作日
总时间 25-40工作日

特色表达体系

● pFastbac1-KHM载体+sf9细胞高效表达

  • 无缝克隆连接不惧任何内切酶位点;
  • N端含有10xHis较常规6xHis在IMAC中具有更强结合能力,同时含有凝血酶位点,可通过酶切去除标签得到无标签蛋白;
  • C端含有MYC-tag可应用于标签抗体WB检测,较His-tag具有更强灵敏度;
  • Amp抗性筛选。

案例展示

案例1:昆虫杆状病毒表达系统高效表达蛋白

采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,该蛋白得到高效表达,细胞裂解液经过SDS-PAGE检测即可看到明显条带,经过纯化后检测,该蛋白表达量高达20mg/L。

蛋白纯化图

泳道1:上样后的穿透液
泳道2:细胞裂解液
泳道3:Marker
泳道4:30 mM咪唑洗脱液
泳道5:60 mM咪唑洗脱液
泳道6:250 mM咪唑洗脱液


案例2:昆虫杆状病毒表达系统表达大分子量蛋白

该项目目的蛋白较大,客户选择基因合成,载体构建,bacmid构建及后期的蛋白表达纯化均在我公司完成,最后该蛋白成功在sf9细胞中表达,表达量达到5mg/L,纯度达到95%,客户收到该蛋白经过验证后,对我们的产品质量非常满意。

蛋白纯化图

泳道1:60 mM咪唑洗脱


案例3:昆虫杆状病毒表达系统表达小分子量蛋白

该蛋白分子量比较小,表达难度较高,采用我公司的pFastBac1-MBP载体进行融合表达后,融合蛋白成功表达,后经过酶切和二次纯化后,目的蛋白纯度达到95%。

蛋白纯化图

泳道1:融合蛋白酶切前
泳道2:融合蛋白酶切后
泳道3:二次纯化后

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