大肠杆菌表达纯化服务

大肠杆菌表达系统结构简单、遗传背景清楚、目的基因表达水平高、培养周期短等优势，被认为最广泛最经济实惠的经典表达系统，近几十年，大肠杆菌表达系统也不断发展和完善，被科研及工业用户大量用于各种重组蛋白表达。该系统主要用于抗原制备、配体制备以及细胞因子和细菌（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等）蛋白的表达。

华美生物在大肠杆菌蛋白表达和纯化方面拥有丰富的经验，通过不断的优化实验条件能解决蛋白表达纯化过程中的各种疑难问题。

拥有丰富的表达纯化经验和专业技术，通过不断的优化实验条件能解决蛋白表达纯化过程中的各种疑难问题。自2007年起的15年里，我们成功开发了7000多种在大肠杆菌中表达的重组蛋白，其中包含数百种高纯度的活性蛋白。

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系统优势服务优势我们承诺服务内容案例展示

系统优势

遗传背景清楚；
蛋白表达周期短，易放大；
生长速度快，表达水平高；
可选择载体和融合标签多；
可调控不同参数得到最适表达。

服务优势

超高性价比，低至3500元起；
表达成功率高达98%；
上清率>72%；
货期短，25个工作日内即可交付；
产量高达200mg/L。

我们承诺

无风险定制，不成功不收费

注：该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质，我们将按步骤收费。

服务内容

步骤	服务项目	服务说明	华美生物特色	周期
1	质粒构建	密码子优化全基因合成	多个载体优化为了得到最高的表达量蛋白,多个载体同时优化，缩短了货期，让客户有更多的选择。	5-10工作日
		PCR扩增产物酶切连接到PCold-SUMO,pGEX-4T-1,pET22b-JT等多个融合载体上
		转化TOP10宿主
		获得测序正确的重组质粒
2	转化及菌株筛选	构建重组质粒转化到BL21(DE3)、Rosetta-gami B(DE3)pLysS、C41等宿主, 37℃过夜培养	多条件优化、多宿主选择小试中对其温度、IPTG量进行优化，优化出合适的培养条件，同时多个宿主进行转化选择表达量最高的宿主菌。	5工作日
		挑取单菌落进行小量诱导表达，SDS-PAGE电泳检测,保种
		进行表达条件优化，确定最佳表达条件
3	目标蛋白表达及纯化	根据小量结果提供1-10L放大体系表达	多条件优化上清表达表达载体和菌株优化，超低温条件诱导，最大程度保持蛋白可溶性达72%以上	12-15工作日
3	目标蛋白表达及纯化	多种表达策略和纯化方式同时进行	多条件优化上清表达表达载体和菌株优化，超低温条件诱导，最大程度保持蛋白可溶性达72%以上	12-15工作日
4	其他（可选）	通过酶切去除标签	灵活的附加服务（可选）提供多种附加服务，客户可根据实验需求灵活选择	3个工作日
4	其他（可选）	所有蛋白都可以提供无菌操作和内毒素去除服务	灵活的附加服务（可选）提供多种附加服务，客户可根据实验需求灵活选择	3个工作日
5	质控	进行纯度、浓度等检查，并提供QC报告	详细的质控报告为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告	3-5工作日
总时间				25-35工作日

案例展示

案例1：

特色：融合表达蛋白采用PreScission酶进行酶切，通过GST亲和层析柱上酶切一步纯化得到无标签蛋白。

蛋白酶切示意图

泳道1：细胞裂解液（箭头所指为融合蛋白）
泳道2：穿透液
泳道3：酶切穿透（箭头所指为目的蛋白）
泳道4：PBS除杂
泳道5：GSH洗脱（箭头所指为GST标签蛋白）
泳道6：目的蛋白浓缩

案例2：

特色：此蛋白通过镍柱亲和层析一步纯化得到目的蛋白，纯度可以达到90%，产量可以达到20mg/L。

泳道1：细胞裂解液
泳道2：穿透液
泳道3：30 mM 咪唑洗脱
泳道4：60 mM 咪唑洗脱
泳道5：200 mM 咪唑洗脱
泳道6：500 mM 咪唑洗脱

案例3：

特色：同个项目可以有多个融合标签选择。

N-terminal GST-tagged

泳道1：细胞裂解液
泳道2：穿透
泳道3：GSH洗脱

N-terminal 6xHis-SUMO-tagged

泳道1：60 mM 咪唑洗脱浓缩
泳道2：200 mM 咪唑洗脱浓缩
泳道3：500 mM 咪唑洗脱浓缩

案例4：

特色：蛋白活性。

The Binding Activity of aqpZ with ytfE

Activity: Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized aqpZ at 5 μg/ml can bind human ytfE, the EC50 of human ytfE protein is 197.90-259.70 μg/ml.