DT3C是一种重组蛋白，由一个没有受体结合域的白喉毒素diphtheria toxin (DT)和链球菌蛋白G（Streptococcus protein G）的C1、C2、C3（3C）结构域构成 ，主要用于体外检测靶细胞对单克隆抗体的内化效率。
DT3C主要应用领域：
- 抗体内化效率的体外评估
- ADC药物研究
- 抗体筛选和评估
DT3C的技术优势：
相比于目前常见的抗体内化效率检测技术（如酸性缓冲液洗脱法、mAb-ZAP法、pHrodo技术等），DT3C重组蛋白测定抗体内化具有操作简单、精准量化的特点，具有广阔的应用前景。
- 制备简单：仅需在室温下孵育30分钟即可形成mAb-DT3C偶联物；
- 多物种适用性：可与来自不同物种的任何IgG结合，形成mAb-DT3C偶联物；
- 快速评估：可通过MTT，WST-1，CTG等方法快速、准确地检测mAb在细胞表面的内化效率；
- 内化效率高：抗体内化效率明显高于Mab-ZAP
可体外检测ADC抗体内化效率
抗体内化效率明显高于Mab-ZAP
参考文献：M. Yamaguchi et al. Biochemical and Biophysical Research Communications 454 (2014) 600–603.
华美生物 DT3C重组蛋白：
华美生物用大肠杆菌表达系统所表达的DT3C重组蛋白，经SDS-PAGE验证，SEC-HPLC检测，纯度高于90%；
我们用不同浓度的DT3C蛋白与CCR8抗体37℃孵育30min后加入培养板培养48h；EC50分别为0.5795-1.400 μg/mL、0.5608-1.318 μg/mL。
CT26/Human CCR8 Stable Cell Line：5000cells/孔；
BMK-1/2：10μg/mL
如何用DT3C检测抗体内化效率？
实验步骤：
- ① 细胞培养：准备对数培养期细胞，对细胞计数并铺板；
- ② DT3C与抗体混合液的配置：在37°C将mAb和DT3C孵育30分钟，形成mAb-DT3C偶联物；
- ③ 细胞处理：将mAb-DT3C偶联物添加到细胞培养基中，使其与细胞相互作用；
- ④ 内化效率评估：使用MTT或其他方法检测mAb在细胞表面的内化效率。
