流式抗体（Flow Cytometry）

Q: 为什么在流式细胞术（FC）中观察到两个或更多的细胞群体？

可能存在的原因有：

a. 存在多个细胞群体表达目标蛋白。您应该检查细胞分离是否充分。

b. 存在细胞二聚体。细胞二聚体将显示为图上大约两倍荧光强度的第二个细胞群体。您应该在染色之前和在流式细胞仪上运行之前使用移液管轻轻混合细胞。

Q：双标免疫荧光中抗体应如何选择？

在进行双标记免疫荧光实验时，选择合适的抗体对于观察两个抗原蛋白在细胞中的共定位情况至关重要。以下是针对不同情况的抗体选择方案：

a. 两种直标抗体：如果可用，应选择带有不同荧光标记物的两个直接标记的一抗。这样可以减少二级抗体交叉反应的风险，并且操作更为简便。

b. 两种间接标记抗体：在这种情况下，需要选择宿主来源（Host）不同的两个一抗，分别搭配不同的荧光标记物二抗，以避免交叉反应。

c. 一个直标抗体加一个间接标记抗体：如果一个是直标一抗的，而另一个是未标记的，那么可以选择宿主来源不同的一抗和相应的二抗。这两种抗体可以同时孵育，因为直接标记的一抗不会与另一个一抗的二抗发生交叉反应。

d. 两个间接标记抗体，相同宿主来源：如果两个一抗的宿主来源相同，那么需要先孵育一个一抗并使用相应的二抗进行检测，然后再孵育第二个一抗，并使用其对应的二抗。这样可以避免相同宿主来源的二抗之间发生交叉反应。